Có thể các bạn mắc phải do suy nghĩ quá nhiều về HIV ! các triệu chứng của HIV giống hệt khi các bạn mắc stress chính vì vậy tôi nghĩ các bạn nên bình tình . Không nên xem bài triệu chứng này đâu tiên hay nói thật về trường hợp của các bạn để các anh có kinh nghiêm trả lời . Rồi xét đến khả năng lây nhiễm nếu quá 50 % thì hãy vô đọc triệu chứng . còn dưới 10 % ( oral sex , ..... ) thì ấn back và đợi 6 tuần và 3 tháng . Good luck Suy nhược cơ thể

Nguồn : Sức khoẻ công Đồng
Tìm kiếm : A.Sai mot li

CÙNG BÀN VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM HIV

I. ĐẶT VẤN ĐỀ:

Những trườnghợp AIDS đầu tiên đượcmô tả ở Mỹ tháng 6, 1981. Nguyên nhân của hội chứng AIDS là một loại retrovirut có tên gọi là HIV. HIV đượcMontagnier và cộng sự phát hiện lần đầu tiên trên thế giới năm 1983 bằng các kỹ thuật hiển vi điện tử, thử nghiệm tìm men phiên mã ngược (RT) trong nước nổi nuôi cấy tế bào, miễn dịch huỳnh quang và kết tủa miễn dịch phóng xạ. Kết quả này sau đó đượcGallo khẳng định năm 1984. HIV gây nhiễm có lựa chọn các tế bào lympho trong đó có CD4 (tế bào T hỗ trợ) gây suy giảm miễn dịch và dẫn đến các nhiễm trùng cơ hội, ung thư, tử vong. HIV cũng gây nhiễm các đại thực bào, các tế bào khác của hệ thần kinh trung ương và có thể dẫn đến làm mất trí. Mặt khác, khi gắn vào ADN của tế bào vật chủ, virút có thể tồn tại tiềm tàng yên lặng trong nhiều năm mà không có biểu hiện của dấu hiệu hay triệu chứng nào cả. Tuy nhiên, 76% những người nhiễm HIV sẽ phát triển AIDS hay phức hợp bệnh có liên quan với AIDS (ARC) sau ít nhất là 7 năm và cũng có thể là tất cả những người nhiễm HIV mà ban đầu họ không chết do các nguyên nhân khác cuối cùng sẽ chết vì AIDS.

Tiếp xúc với các dịch của cơ thể như tinh dịch, máu và dịch tiết âm đạo có thể bị lây truyền HIV. Hầu hết những bệnh nhân AIDS là những người đàn ông tình dục đồng giới, những người nhận máu truyền, những bệnh nhân bị bệnh ưa chảy máu, những người nghiện chích ma tuý tĩnh mạch dùng bơm kim tiêm chung và con của những người mẹ bị nhiễm HIV. Tuy nhiên, vì tỷ lệ nhiễm HIV ngày càng tăng lên, dân chúng sẽ ngày càng có nguy cơ nhiễm HIV qua tình dục khác giới, mà thực tế điều này là rất rõ ràng ở châu Phi.

Nỗi lo sợ nhiễm HIV có thể lây qua con đường truyền máu đã thúc đẩy việc nghiên cứu và đưa ra các kỹ thuật xét nghiệm sàng lọc nhằm phát hiện kháng thể HIV trong máu của những người cho máu mà họ không nhận thấy hay không chấp nhận rằng họ có nguy cơ nhiễm HIV. Hơn nữa, để bảo vệ hệ thống cung cấp máu, xét nghiệm HIV sẽ rất có ích lợi trong việc phòng bệnh ở các nhóm có nguy cơ cao và đưa ra bằng chứng để chuẩn đoán AIDS bởi vì AIDS có các biểu hiện lâm sàng khác nhau.

Nhu cầu của các phòng xét nghiệm thực hiện các kỹ thuật xét nghiệm chuẩn đoán HIV ngày càng lớn. Bài viết này sẽ trình bày các nguyên lý, các bước tiến hành và giá trị của các kỹ thuật xét nghiệm phát hiện HIV và các nguy cơ nhiễm HIV đối với những nhân viên phòng thí nghiệm HIV.

2. Kỹ thuật miễn dịch gắn men ELISA (Enzyme- Linked Immunosorbent Assay)

a) Thử nghiệm ELISA gián tiếp:

Thử nghiệm ELISA phát hiện kháng thể HIV đã đượcphát triển ở các phòng thí nghiệm nghiên cứu ngay sau khi phát hiện ra HIV là tác nhân gây AIDS. Gần như tất cả các hãng sản xuất sinh phẩm đều sử dụng cùng một phương pháp, trong đó kháng nguyên vi rút tinh chế từng phần đượclấy từ vi rút bị phá vỡ hoàn toàn trong nuôi cấy tế bào đượcgắn với các hạt polystyrene hay gắn vào giếng vi lượng của phiến nhựa.

Huyết thanh hay huyết tương đượcủ với kháng nguyên cố định trong thời gian 30 phút đến 2 giờ và sau đó rửa. Nếu kháng thể IgG gắn với hạt hay phiến nhựa, nó sẽ đượcphát hiện khi cho thêm kháng thể kháng IgG vào. Thông thường kháng thể kháng IgG đượcgắn với một men (ví dụ alkaline phosphataza, peroxidaza cây cải ngựa). Sau khi những kháng thể không gắn vào bị rửa đi, phản ứng men sẽ tạo ra màu khi cho thêm cơ chất vào. Một số sinh phẩm ELISA dùng hỗn hợp các kháng thể của chuỗi nặng và chuỗi nhẹ của globulin miễn dịch người (Ig) và do đó có thể phát hiện kháng thể IgM đối với HIV. Các chứng dương và âm đượcxét nghiệm đồng thời để xác định giá trị ngưỡng (cut - off), mà vượt quá giá trị đó là dương tính. Hầu hết các thử nghiệm ELISA đòi hỏi thời gian thực hiện thường là dưới 4 giờ.

Độ nhạy và độ đặc hiệu của các sinh phẩm ELISA trên thị trườnghiện nay là hoàn toàn tốt nếu lấy kết quả Western blot làm chuẩn. Qua nghiên cứu 6 loại sinh phẩm ELISA, độ nhạy và độ đặc hiệu nằm trong khoảng từ 98,1 đến 100% dựa trên việc xét nghiệm 163 người dương tính với Western blot. Qua xét nghiệm 4.900 người cho máu có Western blot âm tính, 0,06 đến 1,3% có dương tính lần đầu và 0,0 đến 0,42% có dương tính lần hai, chứng tỏ độ đặc hiệu là từ 99,6 đến 100%. Tuy nhiên, giá trị dự đoán của thử nghiệm dương tính phụ thuộc nhiều vào tỷ lệ nhiễm HIV trong nhóm dân chúng đượcxét nghiệm. Ở những bệnh nhân AIDS và phức hợp bệnh có liên quan với AIDS (ARC), giá trị dự đoán của thử nghiệm dương tính là 100% đối với 6 loại sinh phẩm, nhưng thay đổi từ 5 - 100% ở nhóm người cho máu. Trong một nghiên cứu khác, giá trị dự đoán của thử nghiệm âm tính là 99,99% trong dân chúng và 76,9% ở những nhóm nguy cơ cao và phụ thuộc vào giá trị ngưỡng để xác định dương tính và tỷ lệ nhiễm HIV. Trong khi sinh phẩm ELISA rất nhạy so với Western blot, cần phải nhớ rằng các thử nghiệm này phát hiện kháng thể kháng HIV chứ không phải kháng nguyên. Do đó, ở những người nhiễm HIV có thể sẽ không có kháng thể trước khi có đáp ứng kháng thể. Đáp ứng kháng thể thường xảy ra sau 2 đến 3 tháng, có thể đến 5 tháng hay lâu hơn nếu hệ miễn dịch của người đó bị tổn thương. Một nghiên cứu mới đây cho thấy rằng, nhiễm HIV im lặng có thể kéo dài đến 34 tháng hoặc lâu hơn mà không có đáp ứng kháng thể để có thể phát hiện đượcbằng thử nghiệm ELISA. Hơn nữa các thử nghiệm ELISA và Western blot chỉ phát hiện kháng thể IgG đối với HIV. Do đó những thử nghiệm này hiện nay không phát hiện đượcnhững người nhiễm HIV trước khi kháng thể IgM chuyển sang IgG. Thời gian chuyển IgM sang IgG đã đượcbáo cáo có thể lên tới 41 tuần lễ. Do đó, việc xét nghiệm theo dõi những người có nguy cơ nhiễm HIV là rất quan trọng. Hơn nữa cần phải lưu ý rằng các thử nghiệm ELISA hiện nay chỉ phát hiện kháng thể của những chủng HIV đang lưu hành phổ biến. Những thử nghiệm này chỉ dương tính 5 (24%) trong tổng số 21 bệnh nhân nhiễm HIV-2.

Mặt khác dương tính giả với ELISA có thể xẩy ra. Nhìn chung kết quả dương tính giả có liên quan ngược lại với mức độ phản ứng của thử nghiệm. Ở các chương trình xét nghiệm sàng lọc máu, những mẫu máu có phản ứng mạnh với ELISA đã có liên quan chặt chẽ với nuôi cấy hay Western blot dương tính (86,7%) so sánh với các mẫu phản ứng yếu và vừa (1,9%). Kết quả dương tính giả có thể là do sự thay đổi nội tại trong việc thực hiện xét nghiệm, bất hoạt huyết thanh bằng nhiệt độ, kháng thể HLA đặc hiệu với kháng nguyên HLADQ3 và DR4 (tìm thấy trong dòng tế bào H-9 để tăng sinh vi rút) và có thể là do nhiễm các kháng nguyên khác từ các dòng tế bào này. Kết quả dương tính giả với ELISA đã đượcbáo cáo là 19% ở bệnh nhân ưa chảy máu, 13% ở bệnh nhân viêm gan nghiện rượu, 4% ở bệnh nhân thẩm phân máu và 24% bệnh nhân có phản ứng giang mai dương tính. Do đó, xét nghiệm khẳng định tất cả các mẫu huyết thanh dương tính lần hai là cần thiết.

b/ Thử nghiệm ELISA cạnh tranh:

Hiện nay đã có các thử nghiệm ELISA cạnh tranh đặc hiệu cho việc phát hiện kháng thể kháng kháng nguyên lõi hay vỏ của HIV, bằng cách gắn các hạt với kháng nguyên lõi hay vỏ tái tổ hợp. Huyết thanh đượcnhững hạt này và kháng thể cộng hợp men kháng kháng nguyên lõi hay vỏ trong 16 - 22 giờ. Tiếp theo là rửa và cho cơ chất vào. Độ chuyển màu phụ thuộc vào lượng kháng thể kháng kháng nguyên vỏ hay lõi có trong huyết thanh. Kháng thể kháng kháng nguyên vỏ thường đượctìm thấy ở mọi lúc ở những người nhiễm HIV, trái lại, hiệu giá kháng thể đối với p24 giảm đi khi người nhiễm HIV có biểu hiện lâm sàng. Do đó, sự giảm hiệu giá kháng thể đối với p24 có thể có ý nghĩa tiên lượng.

c/ Thử nghiệm ELISA Sandwich kháng nguyên

Kỹ thuật căn bản của ELISA kinh điển mới đây đã đượccải biên nhằm tăng độ nhạy và độ đặc hiệu. Kháng nguyên đượcgắn vào một cái giá cứng sẽ hút bám kháng thể có trong mẫu máu xét nghiệm. Sau đó cho thêm vào một kháng thể tương tự đã đánh dấu bằng một enzym, kháng nguyên này sẽ bám vào phần tử kháng thể đã dính vào kháng nguyên của giá cứng. Như vậy hình thành một xăng đuých của một phức hợp kháng nguyên - kháng thể - kháng nguyên đã đượcđánh dấu. Ưu điểm chính của kỹ thuật xăng đuých kháng nguyên là tất cả các lớp kháng thể đều đượcphát hiện, bởi vì người ta không dùng cộng hợp kháng globulin miễn dịch đặc hiệu. Các công ty Wellcome và Abbott đã đưa ra thị trườngloại thử nghiệm thế hệ thứ ba này để phát hiện những kháng thể đối với HIV-1 và HIV-2. Thử nghiệm xăng đuých kháng nguyên kết hợp HIV-1/HIV-2 thế hệ thứ ba của công ty Abbott đượcFDA (cơ quan quản lý thực phẩm và dược phẩm của Mỹ) cấp giấy phép.

e/ Những thử nghiệm chấm - thấm

Những thử nghiệm chấm thấm phát triển từ những năm cuối của thập kỷ 80, có đặc điểm là nhanh chóng và dễ dàng thực hiện, nhưng tốn tiền hơn ELISA và những thử nghiệm ngưng kết. Các thử nghiệm này cho kết quả trong 5-10 phút, một số chỉ có 3 phút. Trong những thử nghiệm này, thường là dùng giá đỡ bằng nitrocelluloza, kháng nguyên đượcthấm (hấp thụ) vào giá đỡ qua những cầu nối kỵ nước rất mạnh. Nói chung kháng nguyên đượcchấm thành một cái vòng nhỏ (một nốt chấm) và thường là một kháng nguyên peptit tổng hợp hay tái tổ hợp. Một dụng cụ bằng plastic giữ lấy các giá đỡ và có mang những miếng lót dưới tờ giấy để thấm huyết thanh và chất phản ứng - trong thử nghiệm HIVCHEK (Ortho), một trong những thử nghiệm nhanh đầu tiên đượcphát triển, chất vàng keo kết hợp với protein A tạo thành chất cộng hợp, đây là một thí dụ về việc dùng một chất có màu để làm chỉ thị. Những thử nghiệm tương tự (thử nghiệm tóm bắt trên giá cứng) dùng những hạt nhỏ có tẩm kháng nguyên, đặt trong một cái màng, gần đây mới đượcphát triển. Những hạt nhỏ li ti này rất có tác dụng trong việc mang kháng nguyên với những số lượng lớn, bởi vì những hạt đó tạo ra một bề mặt rộng. Trong những thử nghiệm đó (Genie và SUDS ), phản ứng xẩy ra trên các hạt nhỏ, sau đó những hạt nhỏ đượcthu thập trên tờ giấy làm cho phản ứng màu xẩy ra có thể đọc đượcbằng mắt thường. Một số thử nghiệm chấm thấm còn có một chấm làm đối chứmg để so sánh xem thử nghiệm có đượcthực hiện đúng hay không và để kiểm tra xem những chất phản ứng có đượccho vào theo đúng thứ tự hay không. Mẫu đối chứng này là một globulin miễn dịch người và rồi sau đó gắn vào cộng hợp để tạo ra một phản ứng màu. Những thử nghiệm chấm thấm kết hợp có những chấm tách riêng HIV-1 và HIV-2 và như vậy những thử nghiệm này có khả năng phân biệt HIV-1 và HIV-2.

Những thử nghiệm chấm thấm rất tiện lợi cho việc sử dụng và có thể là một phương tiện có giá trị trong một số trườnghợp làm xét nghiệm, như là tại phòng cấp cứu, ngân hàng máu, hoặc là phòng giải phẫu thi thể. Tuy nhiên, nếu như phải xét nghiệm một số lớn mẫu huyết thanh, ưu điểm của tính chất nhanh sẽ không còn nữa. Một số thử nghiệm đó có thể giữ ở nhiệt độ phòng tất cả đều có thể đọc đượcbằng mắt thường và không có thử nghiệm nào đòi hỏi thêm trang bị.

Những thử nghiệm nhanh là những thí nghiệm tốt, nhưng vì giá tiền tốn kém cho nên ít đượcsử dụng. Những thử nghiệm này đã đượcáp dụng thành công trong những điều kiện thực địa tại các nước đang phát triển và ngày nay nhiều thử nghiệm này có thể mua đượcvới 1 giá hạ thông qua Tổ chức Y tế Thế giới. Độ chính xác của những thử nghiệm nhanh này tương đương với thử nghiệm ELISA thông thường. Mới đây có một báo cáo đã cho thêm thông tin về kết quả của những thử nghiệm nhanh và so sánh với ELISA. Hiện nay có hai loại thử nghiệm nhanh đượccơ quan FDA cấp giấy phép: Thử nghiệm các hạt nhỏ nắm bắt trên giá cứng SUDS (murex) và thử nghiệm ngưng kết latex recombigen (Cambridge Biotech). 

Các loại sinh phẩm chẩn đoán nhanh hiện nay dang có mặt trên thị trường Việt Nam cũng có một số loại: Geni II của hãng BioRad,  Determine của hãng Abbott.